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用于切除tag的各种酶统计列表

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发表于 2015-8-7 13:26:55 | 显示全部楼层 |阅读模式

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我们做蛋白的,在纯化出tag-fused蛋白后,一般都会将tag切除。切除tag可以利用多种酶,每种酶都有其独特的优势,比如效率高,残余序列少,pH/盐浓度的广谱性等等。这里有2张slice,里面列出了用于切除tag的各种酶以及其特异性切割序列,供大家了解。谢谢大家。
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[发帖际遇]: admin 为实验室解除了一次火灾隐患,蛋白质科学网奖励其 1 贡献,并表示“安全第一,实验第二啊”. 幸运榜 / 衰神榜
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发表于 2015-8-7 13:36:55 | 显示全部楼层
支持下~
[发帖际遇]: a86052 帮助中国解决了一个重大问题,被主席奖励 1 贡献,并对他感慨“你们是早上七八点的太阳,未来是你们的”. 幸运榜 / 衰神榜
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 楼主| 发表于 2015-8-7 13:53:03 | 显示全部楼层

谢谢!  你们一般是用什么酶来切tag啊??
[发帖际遇]: admin 刚刚帮助警察抓小偷了,被奖励 6 贡献. 幸运榜 / 衰神榜
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发表于 2015-8-7 14:36:14 | 显示全部楼层
admin 发表于 2015-8-7 13:53
谢谢!  你们一般是用什么酶来切tag啊??

PPase和TEV用的多些~偶尔也用thrombin,不过觉得不太好用
[发帖际遇]: a86052上课不认真听讲,还流口水,被有关部门扣 4 蛋蛋. 幸运榜 / 衰神榜
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 楼主| 发表于 2015-8-7 14:56:04 | 显示全部楼层
a86052 发表于 2015-8-7 14:36
PPase和TEV用的多些~偶尔也用thrombin,不过觉得不太好用

PPase?我还没听过呢。没用过,不知道啊。tev我以前用过,不过效率真的不是很高。现在我们实验室都是用prescission/3C 和SUMO-protase。效率很高,尤其是SUMO-protease,效率非常非常高,而且切除之后只剩余1个aa
[发帖际遇]: admin最近心情不好,蛋白质科学网代表祖国发来慰问金4 贡献,并带来主席的话“忘记昨天,每一个今天都是新的起跑线”. 幸运榜 / 衰神榜
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发表于 2015-8-7 15:13:01 | 显示全部楼层
admin 发表于 2015-8-7 14:56
PPase?我还没听过呢。没用过,不知道啊。tev我以前用过,不过效率真的不是很高。现在我们实验室都是用pr ...

PPase就是prescission protease。TEV貌似得加挺大的量才行~
[发帖际遇]: a86052 科研决心很坚决,在不利的环境下依然坚持查阅文献,人民很感动,科技部奖励励 8 贡献. 幸运榜 / 衰神榜
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 楼主| 发表于 2015-8-7 16:07:38 | 显示全部楼层
a86052 发表于 2015-8-7 15:13
PPase就是prescission protease。TEV貌似得加挺大的量才行~

哦哦  这样。TEV是要在低盐条件下才能发挥比较好的效率,TEV对盐浓度比较敏感。我以前使用TEV酶切是时候要将盐浓度降到50mM左右切。TEV酶也还是不错的,切完只多余一个aa。
[发帖际遇]: admin 帮助中国解决了一个重大问题,被主席奖励 10 贡献,并对他感慨“你们是早上七八点的太阳,未来是你们的”. 幸运榜 / 衰神榜
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 楼主| 发表于 2015-8-7 16:09:08 | 显示全部楼层
a86052 发表于 2015-8-7 15:13
PPase就是prescission protease。TEV貌似得加挺大的量才行~

没用过thrombin,效果怎么样呢?另外factor Xa用过没?
[发帖际遇]: admin 刚刚帮助警察抓小偷了,被奖励 8 贡献. 幸运榜 / 衰神榜
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发表于 2015-8-7 16:28:06 | 显示全部楼层
我们实验室之前用的thrombin不大好用,效率比较低,不知道什么原因~Factor xa还没有用过~
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发表于 2015-8-7 16:29:28 | 显示全部楼层
admin 发表于 2015-8-7 16:07
哦哦  这样。TEV是要在低盐条件下才能发挥比较好的效率,TEV对盐浓度比较敏感。我以前使用TEV酶切是时候 ...

我的几个蛋白低盐都不行,要搞到300-500 mM的盐
[发帖际遇]: a86052 非常用功读书,蛋白质科学网代表主席奖励其 3 贡献,并表示“为中华崛起而读书”. 幸运榜 / 衰神榜
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