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超详细的微量热泳动MST(Microscale thermophoresis)实验protocol

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发表于 2015-7-12 18:27:27 | 显示全部楼层 |阅读模式

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    微量热泳动仪作为一种新型的分子间相互作用的技术,因其消耗样品量非常少,实验速度非常快的特点,得到了越来越多的科研工作者的喜爱。目前鄙人按照前段时间的培训和操作总结了一份详细的操作步骤资料,分享给各位蛋友,看在辛苦敲键盘的份上,给个赞吧。谢谢大家。    各位蛋友可以点击底部的word文件进行下载~~~~

Protocol截图展示

Protocol截图展示

原理和结果简单展示

原理和结果简单展示

MST操作protocol.doc

162.5 KB, 下载次数: 77

超详细的微量热泳动MST(Microscale thermophoresis)实验protocol

[发帖际遇]: admin 被钱袋砸中进医院,看病花了 4 蛋蛋. 幸运榜 / 衰神榜
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 楼主| 发表于 2015-8-6 14:49:35 | 显示全部楼层

谢谢纠错~~~热烈欢迎
[发帖际遇]: admin昨天上厕所没洗手,有关部门扣其 6 蛋蛋. 幸运榜 / 衰神榜
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发表于 2015-7-12 21:36:55 | 显示全部楼层
太新了,表示还没见识过。。。。。。。。
[发帖际遇]: 老李 帮助中国解决了一个重大问题,被主席奖励 8 贡献,并对他感慨“你们是早上七八点的太阳,未来是你们的”. 幸运榜 / 衰神榜
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发表于 2015-7-12 23:59:18 | 显示全部楼层
[发帖际遇]: 蛋蛋 通宵做实验,蛋白质科学网扣其 2 蛋蛋,并语重心长地对蛋蛋说,“年轻人不要总熬夜”. 幸运榜 / 衰神榜
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发表于 2015-7-13 10:16:19 | 显示全部楼层
ding
[发帖际遇]: 一个袋子砸在了 sylvialou 头上,sylvialou 赚了 2 蛋蛋. 幸运榜 / 衰神榜
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发表于 2015-7-13 10:59:50 | 显示全部楼层
赞一个了
[发帖际遇]: muheifeng 做实验很认真,蛋白质科学网奖励其 3 贡献. 幸运榜 / 衰神榜
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发表于 2015-7-22 16:14:04 | 显示全部楼层
非常楼主感谢分享!不过楼主的资料中有几个小地方值得商榷:
1.在使用柱子去除多余的染料时,因为此时标记已经完成,所以是可以使用含有tris的buffer的;
2.在去除多余的染料这一步,首先将200 uL标记反应体系加入到柱子中,待液体全部流入柱子,此时不用收集;
然后再用300 uL buffer(可以含有tris)冲洗柱子,此时也不用收集;最后用600 uL buffer(可以含有tris)洗脱,
一般前几滴洗脱液可以不用收集,收集完其它所有洗脱液,最后一般会收到500 uL荧光标记好的蛋白。
按照楼主收集洗脱液的方法,很可能收集不到分子量稍小的蛋白。
3.一般首次试验时会尝试MST power20%和40%两个条件;如果没有检测到结合可以再试60%和80%。
[发帖际遇]: johnlenon做科研想象力十足,蛋白质科学网奖励2 贡献,采访TA时,TA说”天才就是我这样的,1%的努力,加上99%的灵感“. 幸运榜 / 衰神榜
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 楼主| 发表于 2015-7-22 16:42:24 | 显示全部楼层
johnlenon 发表于 2015-7-22 16:14
非常楼主感谢分享!不过楼主的资料中有几个小地方值得商榷:
1.在使用柱子去除多余的染料时,因为此时标记 ...

恩,对的,你说的都对。的确TRIS buffer在标记之后我可以使用的,标准的洗脱方法也是你说的那样的洗脱,power也是可以使用多个参数,根据实际情况来来提检测高灵敏度。我那个protocol那些地方的说法是想向初学者强调TRIS buffer标记时候是不能使用的,洗脱的时候也要十分注意不要让多余的染料再流穿下去了。参数那个我是选了个中间数,没有讲太多的,怕太多变得复杂了。

恩,非常感谢你的回复和提议,说的都对,我会更改的~~~非常感谢~
[发帖际遇]: admin 科研决心很坚决,在不利的环境下依然坚持查阅文献,人民很感动,科技部奖励励 8 贡献. 幸运榜 / 衰神榜
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发表于 2015-7-23 14:13:30 | 显示全部楼层
admin 发表于 2015-7-22 16:42
恩,对的,你说的都对。的确TRIS buffer在标记之后我可以使用的,标准的洗脱方法也是你说的那样的洗脱,p ...

[发帖际遇]: johnlenon 通宵做实验,蛋白质科学网扣其 9 蛋蛋,并语重心长地对johnlenon说,“年轻人不要总熬夜”. 幸运榜 / 衰神榜
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发表于 2017-3-21 15:06:50 | 显示全部楼层
大师兄威武!
[发帖际遇]: 蛋白蛋清蛋黄 讲文明,树新风,蛋白质科学网奖励其 4 贡献. 幸运榜 / 衰神榜
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