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PUC19质粒小抽浓度总是很低,为什么?

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银蛋

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发表于 2018-2-13 02:40:58 | 显示全部楼层 |阅读模式

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PUC19质粒小抽浓度总是很低,为什么?
PUC19应该是松弛型质粒对吧?本来是高拷贝的,但是现在我每次只能抽出很低的浓度,4ml菌小抽,40uL buffer洗脱,才30-50ng/ul。已结抽过很多次了,也换过菌。KIT是应该没问题的,因为同期抽其他的质粒,都能抽出很高的浓度。why?求解
[发帖际遇]: DH5a 查阅资料很仔细,蛋白质科学网奖励其 5 贡献. 幸运榜 / 衰神榜
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QQ
发表于 2018-2-13 08:58:56 | 显示全部楼层
菌是否摇够了?裂解buffer是否正常(例如天冷了SDS析出)?Washing buffer有没有完全除去(乙醇残留影响洗脱)?
[发帖际遇]: jhtjs2015最近实验不顺,蛋白质科学网慰问jhtjs2015 ,奖励10 贡献,并告诫“强者不是微笑着的人,而是哭着依然坚持奔跑的人”. 幸运榜 / 衰神榜
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 楼主| 发表于 2018-2-13 22:48:54 | 显示全部楼层
jhtjs2015 发表于 2018-2-13 08:58
菌是否摇够了?裂解buffer是否正常(例如天冷了SDS析出)?Washing buffer有没有完全除去(乙醇残留影响洗 ...

菌摇了18小时,还是一样的。Kit应该没有问题的啊,抽其他的质粒都是使用相同的buffer,以及相同的操作。。。是不是质粒本身突变了导致复制不好了??
[发帖际遇]: 一个袋子砸在了 DH5a 头上,DH5a 赚了 4 蛋蛋. 幸运榜 / 衰神榜
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发表于 2018-2-14 08:52:39 | 显示全部楼层
DH5a 发表于 2018-2-13 22:48
菌摇了18小时,还是一样的。Kit应该没有问题的啊,抽其他的质粒都是使用相同的buffer,以及相同的操作。 ...

这个不清楚,应该不太可能吧
[发帖际遇]: jhtjs2015 很爱好问问题,不错,蛋白质科学网打赏其 1 贡献. 幸运榜 / 衰神榜
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