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有人从大肠杆菌内纯化过RNA吗?

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水蛋

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发表于 2018-2-4 05:01:21 | 显示全部楼层 |阅读模式

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大家好,
有人从大肠杆菌内纯化过RNA吗?过表达转录RNA后,我再破菌纯化,能否拿到RNA?感谢!
[发帖际遇]: RNA 查阅资料很仔细,蛋白质科学网奖励其 6 贡献. 幸运榜 / 衰神榜
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发表于 2018-2-5 13:46:09 | 显示全部楼层
过表达什么类型的RNA呢?mRNA rRNA tRNA,怎么确认你的过表达呢?
[发帖际遇]: clear 发帖时在路边捡到 4 蛋蛋,偷偷放进了口袋. 幸运榜 / 衰神榜
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 楼主| 发表于 2018-2-5 23:12:36 | 显示全部楼层
clear 发表于 2018-2-5 13:46
过表达什么类型的RNA呢?mRNA rRNA tRNA,怎么确认你的过表达呢?

就是非编码的RNA,并非是表达蛋白的,因为没有核糖体结合位点以及AUG,就当做是过表达的total RNA吧。可以体外跑Urea gel测试表达情况
[发帖际遇]: RNA 科研决心很坚决,在不利的环境下依然坚持查阅文献,人民很感动,科技部奖励励 7 贡献. 幸运榜 / 衰神榜
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发表于 2018-2-6 18:06:52 | 显示全部楼层
我纯化过tRNA,拿酚抽过不同的柱子,还可以用biotin-streptavidin。
[发帖际遇]: clear 查阅资料很仔细,蛋白质科学网奖励其 8 贡献. 幸运榜 / 衰神榜
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 楼主| 发表于 2018-2-8 06:07:36 | 显示全部楼层
clear 发表于 2018-2-6 18:06
我纯化过tRNA,拿酚抽过不同的柱子,还可以用biotin-streptavidin。

怎么确定纯化出来的RNA就是你的tRNA呢
[发帖际遇]: RNA 发帖时在路边捡到 2 蛋蛋,偷偷放进了口袋. 幸运榜 / 衰神榜
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发表于 2018-4-24 11:20:02 | 显示全部楼层
这是个好问题,需要跑电泳检测分子量,一般biotin钓出来的tRNA比较纯
[发帖际遇]: clear 做实验很认真,蛋白质科学网奖励其 8 贡献. 幸运榜 / 衰神榜
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发表于 2018-7-26 11:03:52 | 显示全部楼层
clear 发表于 2018-4-24 11:20
这是个好问题,需要跑电泳检测分子量,一般biotin钓出来的tRNA比较纯

你好,我纯化出来的tRNA 连接酶带有很多的RNA,不知道用什么办法清除?请大神指教
[发帖际遇]: 一个袋子砸在了 洛水东流 头上,洛水东流 赚了 1 蛋蛋. 幸运榜 / 衰神榜
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发表于 2018-7-26 21:37:55 | 显示全部楼层
洛水东流 发表于 2018-7-26 11:03
你好,我纯化出来的tRNA 连接酶带有很多的RNA,不知道用什么办法清除?请大神指教
...

纯化的时候拿2-4M 盐的buffer洗一洗
[发帖际遇]: DH5a 刚刚帮助警察抓小偷了,被奖励 7 贡献. 幸运榜 / 衰神榜
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