蛋白质科学网

 找回密码
 注册
查看: 434|回复: 6
收起左侧

TAE/TBE running buffer浓度会影响胶回收效率吗?

[复制链接]

6

主题

33

帖子

4639

积分

彩蛋

Rank: 6Rank: 6

积分
4639
发表于 2018-1-11 01:49:37 | 显示全部楼层 |阅读模式

马上注册,共享更多资源。

您需要 登录 才可以下载或查看,没有帐号?注册

x
最近胶回收效率极低,7-8微克质粒最后胶回收只能700 纳克,效率大概是10%,太低了。我跑胶使用的是1xTAE配胶和跑胶, 所以,TAE/TBE running buffer浓度会影响胶回收效率吗?谢谢!

[发帖际遇]: DH5a 刚刚帮助警察抓小偷了,被奖励 5 贡献. 幸运榜 / 衰神榜
回复

使用道具 举报

7

主题

357

帖子

9万

积分

版主

Rank: 7Rank: 7Rank: 7

积分
94358
QQ
发表于 2018-1-11 08:37:09 | 显示全部楼层
没有研究过buffer问题,不过我实验室用的是0.5 X TAE
[发帖际遇]: jhtjs2015 刚刚帮助警察抓小偷了,被奖励 4 贡献. 幸运榜 / 衰神榜
回复 支持 反对

使用道具 举报

6

主题

33

帖子

4639

积分

彩蛋

Rank: 6Rank: 6

积分
4639
 楼主| 发表于 2018-1-12 04:16:34 | 显示全部楼层
jhtjs2015 发表于 2018-1-11 08:37
没有研究过buffer问题,不过我实验室用的是0.5 X TAE

OK  感谢
[发帖际遇]: DH5a 做实验很认真,蛋白质科学网奖励其 2 贡献. 幸运榜 / 衰神榜
回复 支持 反对

使用道具 举报

7

主题

357

帖子

9万

积分

版主

Rank: 7Rank: 7Rank: 7

积分
94358
QQ
发表于 2018-1-12 08:54:02 | 显示全部楼层

用胶回收得注意下切胶的大小,和溶胶时注意混匀,这对回收率也有影响
[发帖际遇]: jhtjs2015 看见老人跌倒没有扶,被有关部门扣了 10 蛋蛋. 幸运榜 / 衰神榜
回复 支持 反对

使用道具 举报

121

主题

632

帖子

7万

积分

管理员

Rank: 9Rank: 9Rank: 9

积分
75754
发表于 2018-1-18 05:44:52 | 显示全部楼层
个人觉得还是有可能的。因为吸附柱吸附DNA是在酸性pH的条件下才能吸附,如果你配胶和跑胶的buffer浓度过高,之后再做胶回收时候有可能溶胶buffer不能完全把pH调整到酸性,因此有可能就会造成吸附不牢,效率不高的问题。一般1XTBE/TAE,Tris的浓度大概是50mM
[发帖际遇]: 一个袋子砸在了 admin 头上,admin 赚了 2 蛋蛋. 幸运榜 / 衰神榜
回复 支持 反对

使用道具 举报

26

主题

131

帖子

1万

积分

版主

Rank: 7Rank: 7Rank: 7

积分
16588
发表于 2018-1-30 19:03:13 | 显示全部楼层
我觉得running buffer只要跑得没问题,应该就问题。回收效率低,我觉得有几个可能要注意的事项,许多KIT里面没写到。
[发帖际遇]: muheifeng上课不认真听讲,还流口水,被有关部门扣 1 蛋蛋. 幸运榜 / 衰神榜
回复 支持 反对

使用道具 举报

26

主题

131

帖子

1万

积分

版主

Rank: 7Rank: 7Rank: 7

积分
16588
发表于 2018-1-30 19:09:30 | 显示全部楼层
1. 溶胶后,先放冰上冷却,再上吸附柱;洗脱液,热浴后,再洗脱。也就是冷上柱,热洗脱,可提高得率。
2. 溶胶buffer加太少,导致不能有效缓冲。
3. wash buffer用后没有及时盖紧,导致乙醇挥发,浓度降低,而使部分核酸被洗下,可考虑补加乙醇(乙醇终浓度不得低于60%,否则会洗脱核酸)。
[发帖际遇]: muheifeng最近心情不好,蛋白质科学网代表祖国发来慰问金3 贡献,并带来主席的话“忘记昨天,每一个今天都是新的起跑线”. 幸运榜 / 衰神榜
回复 支持 反对

使用道具 举报

您需要登录后才可以回帖 登录 | 注册

本版积分规则

QQ|Archiver|手机版|蛋白质科学网 ( 沪ICP备15022641号

GMT+8, 2018-5-21 03:51 , Processed in 0.406246 second(s), 38 queries .

Powered by Discuz! X3.2

© 2001-2013 Comsenz Inc.

快速回复 返回顶部 返回列表